植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌混菌发酵饲料对肉鸡生长性能、屠宰性能和肠道结构的影响
摘要：应用发酵饲料是减抗替抗的一种有效方法，已经得到了大家的共识。发酵饲料原料，甚至是全价饲料发酵的研究与应用已成为行业发展的大趋势。发酵饲料是以微生物、复合酶为发酵剂，将饲料原料转化为微生物菌体蛋白、生物活性小肽类氨基酸、活性益生菌、复合酶制剂为一体的生物饲料。近年来，大量的研究表明发酵饲料可以改善动物生产性能、提高动物机体免疫力、改善肠道微生态平衡。用来生产发酵饲料的常用微生物主要有乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、霉菌（黑曲霉和米曲霉）、粪链球菌等。乳酸菌是应用最早、最广泛的菌种，兼性需氧或严格厌氧条件下生长，能利用碳水化合物进行发酵，主要产生乳酸。应用乳酸菌发酵饲料过程中会产生大量乳酸，可改善饲料的适口性，降低ｐＨ，抑制肠道有害菌的生长，从而减少贮藏过程中干物质和营养物质的损失。芽孢杆菌是一种好氧菌，可以将蛋白质降解为小肽，将多糖降解为易吸收的低分子糖，从而提高动物的生长速度和饲料利用率。在长期的实践中，人们发现发酵过程中有很多重要的生化反应过程仅依靠单一的菌株是不能完成的，必须利用两种或多种微生物共同作用完成，因此混合菌种发酵逐渐发展起来。近年来，利用混合菌种进行发酵的研究越来越多，并取得了很好的效果。但是由于肉鸡肠道相对短，如何在肉鸡饲料中科学有效地应用仍需要大量的试验进行验证和研究。本试验选用植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌对肉鸡全价饲料进行混菌发酵，并按一定比例添加在肉鸡全价饲料中，研究其对肉鸡生长性能、免疫功能和肠道发育的影响，为微生物发酵饲料在肉鸡饲料中的推广和应用提供参考。
材料与方法
在配制好的基础日粮中添加由农业农村部饲料生物技术重点实验室筛选并保藏的植物乳杆菌（活菌数1.0×109CFU/g）和枯芽孢杆菌（活菌数1.0×109CFU/g），加入30％蒸馏水混合均匀，装入呼吸袋（PA/PE七层共挤膜，50cm×80cm）常温（25～35℃）厌氧发酵5d。每个呼吸袋装入发酵底物15kg。
试验分2个阶段进行，1~21日龄为试验前期，22~42日龄为试验后期。采用笼养，1~3日龄光照时间为24h/d，4~7日龄为23h/d，之后为16h/d。乳头式饮水器供水，自由采食，常规免疫。
于21和42日龄时，鸡空腹１２ｈ后，以重复为单位进行称重，记录采食量，计算1~21、22~42和1~42日龄的平均体重（ABW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）。
于42日龄时，每重复随机选取１只鸡，按《家禽生产性能名词术语和度量统计法》（NY/T 823-2004）测定屠宰率、全净膛率、半净膛率、腿肌率、胸肌率和腹脂率。计算公式为：
屠宰率（％）=（屠体重／宰前体重）×１００％；
全净膛率（％）=（全净膛重/宰前体重）×１００％；
半净膛率（％）=（半净膛重/宰前体重）×１００％；
腹脂率（％）=（腹脂重／（全净膛重＋腹脂重））×１００％；
腿肌率（％）=（腿肌重／全净膛重）×１００％；
胸肌率（％）=（胸肌重／全净膛重）×１００％。
42日龄时，每个重复选取体重接近平均体重的１只鸡，取回肠、十二指肠和空肠，中段处剪下约1cm的肠段，用生理盐水洗净后放入４％甲醛固定液中固定。将固定好的样品按病理检验标准操作程序进行。脱水、修剪、包埋、切片、染色、封片，采用ＢＡ２００Ｄｉｇｉｔａｌ数码三目摄像显微摄像系统对切片进行图像采集，采集４０倍图片测定绒毛长度和隐窝深度，并计算绒毛长度／隐窝深度（V/C）。
数据采用 SPSS 16.0 软件的单因素方差分析（One－WayANOVA）对发酵饲料的替代水平进行显著性检验，对差异显著者采用 LSD 多重比较，显著水平设为0.05。
结果
由表3可知，在生长前期，F10组肉鸡平均日采食量和料重比最低，显著低于F20组（P＜0.05），对照组和F10组间差异不显著（P＞0.05）。生长后期，F10组平均日增重最高，料重比与对照组差异不显著（P＞0.05）；F20组料重比显著高于其他两组（P＜0.05）。从全期来看，与对照组相比，F10组肉鸡平均日增重有增加的趋势（P＝0.05），料重比显著低于对照组和F20组（P＜0.05）。
由表4可知，添加发酵饲料对肉鸡的屠宰性能没有显著影响（P＞0.05）。
由表5可知，F20组42日龄肉鸡的回肠隐窝深度显著高于对照组和F10组（P＜0.05）；由表6可知，F10和F20组42日龄肉鸡十二指肠绒毛长度显著高于对照组（P＜0.05）；由表7可知，F10和F20组42日龄肉鸡十二指肠和空肠绒毛长度／隐窝深度显著高于对照组（P＜0.05）。
讨论
生长性能是衡量发酵饲料是否有效的最重要的指标。大部分研究结果表明发酵饲料对肉鸡生长性能的影响是有正向作用的。舒刚等以枯草芽孢杆菌和保加利亚乳杆菌作为发酵菌种，日粮不制粒，粉料饲喂，添加不同比例的发酵饲料发现，试验组和药物组相比，日增重较高，料重比降低。倪玉娇等将芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌作为发酵菌种，以棉籽粕、芝麻饼、DDGS为底物，常温20℃发酵96h制得发酵饲料，当发酵饲料用量为15％时，对肉仔鸡平均日增重有显著影响，用量为10％时，节省的饲料成本最多。张伟伟等采用白地霉、热带假丝红酵母和啤酒酵母混菌发酵马铃薯渣，马铃薯渣发酵饲料能降低肉鸡的料重比，提高饲料中蛋白质的利用率。林丽花等指出，在1~4周龄黄羽肉鸡日粮中用９％发酵豆粕替代普通豆粕，可提高肉鸡平均日增重、降低料重比和死淘率。本试验添加发酵饲料后制粒，F10组全期的肉鸡平均日增重与其他两组相比有增加的趋势，料重比显著下降。原因可能是发酵过程使饲料中复杂的大分子物质如淀粉、纤维素、蛋白质等降解为动物易消化吸收的小分子物质单糖、双糖、低聚糖和氨基酸，产生微生物菌体蛋白以及微生物代谢产物。20％比例替代组料重比显著高于10％比例替代组，可能是因为微生物生长会消耗营养物质，添加比例过大会降低饲料的营养浓度，反而使肉鸡生长性能下降。
屠宰性能是衡量肉鸡肉用性能的主要指标。祁瑞雪使用发酵豆粕替代普通豆粕（发酵豆粕含有地衣芽孢杆菌1.2×107CFU/g，高活性酵母菌1.0×107CFU/g），6％的发酵豆粕替代豆粕可显著提高肉鸡屠宰率、全净膛率和腿肌率。本试验各处理组的屠宰性能没有显著差异。不同试验中发酵饲料应用效果的结果不一致可能与发酵菌种、生产工艺、活菌数量及替代剂量、饲料是否灭菌或制粒等有关系。
小肠是肉鸡对营养物质进行消化和吸收的主要场所，小肠绒毛发育的情况及其对养分的利用直接影响着机体的生长发育情况。肠道绒毛的长度与绒毛上的细胞数量呈显著正相关，只有成熟的细胞才具备吸收养分的功能。因此，肠道绒毛长说明成熟细胞多，机体对养分的吸收利用能力则强。隐窝深度反映了隐窝细胞的增殖率和成熟度。绒毛长度／隐窝深度可反映小肠的功能状况，其值下降表明消化吸收功能下降，Missotten等使用植物乳杆菌发酵饲料饲喂肉鸡，发酵饲料组空肠和回肠中段的绒毛长度较对照组分别提高了22.6％和16.0％。Sun等研究指出，发酵过程产生的小肽能够改善断奶仔猪肠道黏膜结构，增加营养物质的吸收利用效率。而未经发酵的普通豆粕含较多的大豆蛋白和植物凝集素等抗原物质，这些抗原物质会给肉鸡肠道造成损伤，使得肠绒毛上皮细胞的成熟数量减少、成熟速度缓慢，造成动物消化吸收能力减弱，饲料未及时被消化而堆积在肠道内引起内容物发酵、有害菌大量繁殖，有害菌分泌的肠毒素反过来损伤肠道绒毛结构，如此反复循环，阻碍肉鸡的生长发育。本试验中，F20组42日龄肉鸡的回肠隐窝深度显著高于对照组和F10组。F10和F20组42日龄肉鸡十二指肠绒毛长度、十二指肠和空肠的绒毛长度／隐窝深度均显著高于对照组。由此可以推断发酵饲料有利于绒毛上细胞的生长和成熟，从而使得养分吸收的面积变大，提高营养成分的吸收效率，这与发酵组具有较好的生长性能相对应。
结论
本试验条件下，发酵饲料以10％的比例替代全价饲料，肉鸡全期的平均日增重有增加的趋势，料重比显著下降；以20％的比例替代全价饲料，肉鸡的回肠隐窝深度显著增加。发酵饲料以10％和20％的比例替代全价饲料，肉鸡的十二指肠绒毛长度、十二指肠和空肠的绒毛长度／隐窝深度显著高于对照组。
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