３.１　饲粮中添加ＹＣ对舍饲牦牛瘤胃发酵参数的影响　　

瘤胃ｐＨ是瘤胃生理状况的最直接表现，与饲粮组成和营养成分密切相关，可综合反映瘤胃微生物代谢和有机酸产生、吸收、排除及中和的状况。Ｙｏｏｎ等研究表明，反刍动物瘤胃ｐＨ为６.２～６.８时，瘤胃中发酵纤维物质的微生物活性最高，ｐＨ为５.５～６.０时，瘤胃中发酵淀粉的微生物活性最强，当瘤胃ｐＨ降低到５.５以下时，动物容易出现酸中毒。本试验中，各组ｐＨ均处于正常生理范围内，随着ＹＣ添加水平的升高呈线性降低的趋势，与Ｅｒａｓｍｕｓ等在奶牛中的研究结果一致，可能是由于ＹＣ促进了饲粮中营养物质的快速降解，加速有机酸的积累，导致瘤胃ｐＨ下降。　　

ＮＨ３⁃Ｎ的含量可直接反映瘤胃中微生物生长状况，也是ＭＣＰ合成主要原料。研究表明最适宜瘤胃微生物生长的ＮＨ３⁃Ｎ含量为１０～５０ｍｇ／ｄＬ。本试验中，随着ＹＣ添加水平的升高，ＮＨ３⁃Ｎ含量逐渐降低，与Ｅｒａｓｍｕｓ等的结果一致，在奶牛饲粮中添加ＹＣ能降低瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。而Ｈｒｉｓｔｏｖ等在奶牛中的研究发现，ＹＣ对瘤胃含量无显著影响，Ｌｉｕ等在绵羊的饲粮中添加ＹＣ能够增加瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。不同的结果可能与动物品种、饲粮组成、ＹＣ的来源、添加形式等有关。瘤胃内ＮＨ３⁃Ｎ和ＭＣＰ的含量密切相关，ＭＣＰ的含量可以反映微生物摄取和利用ＮＨ３⁃Ｎ的能力。本试验中，随着ＹＣ添加水平的升高，ＭＣＰ的含量线性升高，与Ｄｉａｓ等的研究结果一致，在泌乳奶牛饲粮中添加ＹＣ降低了瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量，增加了ＭＣＰ的合成。Ｙｏｏｎ等研究表明，ＹＣ能提高瘤胃微生物的活性和生长繁殖，刺激蛋白分解菌的生长，加快ＮＨ３⁃Ｎ的生成和ＭＣＰ的合成。

ＶＦＡ是瘤胃内碳水化合物发酵的主要产物，是反刍动物主要的能量来源，包括乙酸、丙酸、丁酸及少数短链脂肪酸和支链脂肪酸。乙酸、丙酸和丁酸含量较高，其含量约占ＴＶＦＡ的９５％左右，其中丙酸的转化效率最高，乙酸最低。丙酸在糖异生作用下合成葡萄糖，乙酸是乳脂合成的主要前体，在动物生产中丙酸比例越高，可为机体提供的能量越高。研究表明，在反刍动物饲粮中添加ＹＣ可增加ＶＦＡ的含量，也有研究表明，瘤胃中ＶＦＡ的含量与ＹＣ的添加水平无显著关系。本试验中，随着ＹＣ添加水平的升高，瘤胃内乙酸比例和乙酸／丙酸显著降低，丙酸比例显著增加。与Ｈａｒｒｉｓｏｎ等在泌乳奶牛饲粮中添加ＹＣ增加瘤胃丙酸比例和降低乙酸比例的结果一致。这说明在舍饲牦牛饲粮中添加ＹＣ可以使牦牛瘤胃发酵类型由乙酸型向丙酸型转变，在采食量相同的情况下，促进舍饲牦牛的增重。

３.２　饲粮中添加ＹＣ对舍饲牦牛瘤胃微生物区系的影响　　

１６Ｓ ｒＲＮＡ高通量测序技术可以很好地揭示反刍动物瘤胃微生物多样性。本试验中，２０个样品通过Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ平台测序后共获得９１７７７０条优化序列，平均长度为４４０ｂｐ，共聚类得到１４６３个ＯＴＵ。略高于杨琦玥等在牦牛中的研究结果。Ｍａｏ等研究发现，覆盖度高于９７％说明测序样品取样充分。本试验中各组覆盖度均高于０.９９，说明本次测序结果能真实地反映舍饲牦牛瘤胃细菌群落种类和结构多样性。Ｓｈａｎｎｏｎ指数和Ｓｉｍｐｓｏｎ指数可反映瘤胃菌群的多样性，Ｓｈａｎｎｏｎ指数越大，群落多样性越高；Ｓｉｍｐｓｏｎ指数越小，群落多样性越高。Ａｃｅ指数和Ｃｈａｏ指数可反映瘤胃菌群的丰富度，其数值越大，群落丰富度越高。本试验中，在舍饲牦牛中添加ＹＣ不会影响瘤胃细菌多样性，但会增加瘤胃细菌的丰富度。　

研究表明，拟杆菌门和厚壁菌门是反刍动物瘤胃中的优势菌门。牦牛瘤胃中的优势菌门为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和螺旋菌门，本试验中，舍饲牦牛瘤胃优势菌门为拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门，与前人研究基本一致。Ｅｖａｎｓ等研究发现，拟杆菌门在非纤维物质的降解中发挥重要作用，而厚壁菌门主要参与纤维物质的分解。非纤维物质经瘤胃发酵后产生丙酸，而纤维物质被降解后主要产生乙酸。本试验中，随着ＹＣ添加水平的升高，拟杆菌门相对丰度逐渐增加，厚壁菌门的相对丰度逐渐降低，但差异不显著，同时，丙酸比例线性升高，乙酸比例线性降低。这可能与本试验在舍饲条件下进行，牦牛采食了大量的精料，使得分解淀粉、可溶性碳水化合物的拟杆菌门的相对丰度升高有关。这说明ＹＣ可促进拟杆菌门微生物的生长、增殖，降解饲粮中非纤维类物质产生更多的丙酸。螺旋菌门能够降解纤维素、半纤维素、果胶等，对植物类纤维物质转化为ＶＦＡ产生重要影响。本试验中，螺旋菌门的相对丰度先升高后降低，呈二次曲线变化。这表明在牦牛饲粮中添加１％的ＹＣ可促进瘤胃微生物对纤维类物质的降解，同时与纤维降解密切相关的纤维杆菌门也呈现相似的变化趋势，其在Ⅲ组（１％）纤维杆菌门相对丰度最高。这说明ＶＦＡ含量与组成的变化可能与不同微生物对纤维物质和非纤维物质降解程度有关。疣微菌门在哺乳动物胃肠道免疫耐受中起主要作用，其物种丰度的减少或缺失与宿主免疫力的下降密切相关。本研究中，随着ＹＣ添加水平的升高，疣微菌门的相对丰度线性升高。这表明在饲粮中添加ＹＣ可能与增强机体免疫力相关。　

张红涛研究荷斯坦后备牛瘤胃微生物组成时发现，普雷沃氏菌属和琥珀酸菌属是瘤胃细菌区系的优势菌属。高雨飞通过测序发现锦江牛瘤胃细菌多样性发现在属水平普雷沃氏菌属、帕拉普氏菌属、理研菌属是优势菌属。本试验中，舍饲牦牛瘤胃中优势菌属为普雷沃氏菌属１、拟杆菌目ＢＳ１１和理研菌科ＲＣ９，与前人研究结果不完全一致，推测可能由动物品种、年龄、饲粮结构、饲养管理等不同引起的。普雷沃氏菌属是瘤胃中数量最多的一类拟杆菌门菌属，参与多种微生物代谢、具有较高活性的半纤维素降解能力和适应不同饲粮结构的能力，在粗蛋白质、淀粉、木聚糖和果胶的降解过程中发挥重要作用。本试验中，普雷沃氏菌属１的相对丰度最高，与前人研究结果一致，且各组间差异不显著。这可能是本研究饲粮粗蛋白质和能量水平相近，没有对普雷沃氏菌属的相对丰度产生显著影响。瘤胃球菌属包括黄色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌，是瘤胃中主要的纤维降解菌，能产生大量的纤维素酶、半纤维素酶和木聚糖酶，降解粗饲料中的纤维素和半纤维素。本研究中，瘤胃球菌属２的相对丰度呈二次曲线变化，表明在舍饲牦牛饲粮中添加ＹＣ可以促进瘤胃球菌的生长、增殖，提高饲粮中纤维的降解率。瘤胃菌科是厚壁菌门中一种革兰氏阴性菌，可降解纤维物质产生乙酸。本试验中，瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１、瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相对丰度随ＹＣ添加水平的升高而线性降低，使得乙酸比例呈线性降低，推测可能与ＹＣ促进非纤维降解菌的生长、增殖和饲养管理方式有关。同时，本试验还发现瘤胃球菌科ＮＫ４Ａ２１４的相对丰度与乙酸比例呈显著正相关，且瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相对丰度与瘤胃液ｐＨ呈显著正相关，ＮＨ３⁃Ｎ含量与瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１的相对丰度呈显著正相关。这说明疣微菌科不同属的代谢能力不同，其中ＮＫ４Ａ２１４＿ｇｒｏｕｐ、ＵＣＧ⁃００１和ＵＣＧ⁃０１４菌属可能参与ＶＦＡ代谢，而ＵＣＧ⁃０１１属的相对丰度可能与ＮＨ３⁃Ｎ含量的产生密切相关。克里斯滕森菌科属于厚壁菌门，在维持胃肠道结构和功能和动物机体免疫调节方面发挥重要作用。本试验中，克里斯滕森菌科Ｒ７的相对丰度随着ＹＣ添加水平的升高而降低，且与瘤胃ｐＨ和ＮＨ３⁃Ｎ含量呈显著正相关，表明克里斯滕森菌科与ＶＦＡ和ＮＨ３⁃Ｎ的代谢相关，说明ＹＣ通过改善瘤胃微生物相对丰度，维持肠道结构和功能，进而调节机体的免疫力。

4结论