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耐高温乳酸菌的选育及应用研究

2017-02-13 20:30:08      点击:

摘要】 本实验从青贮玉米饲料、果渣、牛奶、新鲜的泡菜汁等样品中筛选耐高温乳酸菌。通过初筛、复筛,获得一株耐高温且产酸能力较强的菌株L1;依据伯杰氏系统细菌学手册和乳酸菌分类鉴定的标准和描述,对其进行了生理生化特性鉴定并确定其为乳杆菌属(lacotobacillus)德氏乳杆菌(Lactobacillus delbbruecki)。对L1菌株进行He-Ne激光诱变育种研究,经过多次诱变,在大量突变株中选到了一株耐高温、产酸能力强的菌株TL1,在70℃高温培养下突变株菌数量是原菌株的12倍,菌数量最多达1.275×109个/mL;且其具有良好的遗传稳定性。通过单因素试验和正交试验确定突变菌株TL1的最佳增殖培养基组分为:玉米粉16%+麸皮5%;在α-淀粉酶(5u/g玉米粉、90℃、30min)和糖化酶(150u/g玉米粉、55℃、2~3h)酶解作用下,最佳发酵条件为:发酵温度60℃,发酵时间36h,pH值3.5。在青贮玉米应用试验中,结果表明:添加TL1菌后,腐败菌随着时间的延长总菌数最后为零;感官评定结果显示:青贮饲料处理组效果明显地优于对照组的效果;对处理组和对照组的化学分析表明:处理组的丁酸含量降低为零,乳酸和丙酸的含量增加;酸性洗涤纤维含量降低了31.2%;木质素含量降低了5%;氨态氮含量降低了36.4%;干物质消化率提高了43.52%;饲喂试验结果表明:奶牛的日产奶量可提高1kg以上,有显著的增产效果。综合以上结果得出:添加TL1菌后快速降低了青贮饲料pH值,显著降低了青贮饲料的霉变程度,减少了青贮物料的损耗,提高了青贮饲料的品质。在堆肥应用试验中,结果表明:添加TL1菌后pH值显著下降;挥发性有机质含量下降了50%;小麦种子发芽率提高了4%,综合以上结果可以得出:添加TL1菌株显著缩短了到达高温期的时间,且高温持续时间较长,改善了堆料的质地,促进了腐熟的时间,提高了小麦种子的发芽率。

第一章 文献综述 11-34
1 耐高温乳酸菌的研究概况 11-19
1.1 嗜温乳酸菌的特性及有关科属 11
1.2 嗜热乳酸菌特性及有关科属 11
1.3 微生物耐高温机理探究 11-14
1.4 乳酸菌的鉴定方法 14-16
1.5 激光诱变育种 16-17
1.6 相关领域国内外现状和发展趋势 17-19
2 乳酸菌在青贮饲料中的应用 19-29
2.1 青贮及乳酸菌青贮添加剂的概念 19
2.2 青贮饲料的特点 19-20
2.3 青贮原理 20-22
2.4 青贮添加剂 22-25
2.5 青贮饲料中添加乳酸菌的目的 25-26
2.6 青贮饲料中乳酸菌种的选择 26
2.7 影响乳酸菌青贮添加剂效果的因素 26-27
2.8 乳酸菌青贮添加剂的使用效果 27
2.9 相关领域国内外技术现状和发展趋势 27-29
3 乳酸菌在生活垃圾堆肥处理中的应用 29-32
3.1 生活垃圾堆肥技术的研究概况 29
3.2 堆肥的基本原理 29-30
3.3 堆肥化微生物的变化过程 30
3.4 微生物在高温堆肥过程中的作用 30-31
3.5 乳酸菌在堆肥中的作用 31-32
3.6 相关领域的研究概况 32
4 立题意义和本论文的研究内容 32-34
第二章 耐高温乳酸菌的选育及鉴定 34-43
2.1 材料 34-36
2.2 实验方法 36-37
2.2.1 乳酸细菌的分离、纯化 36-37
2.2.2 耐高温乳酸细菌的选育 37
2.2.3 耐高温乳酸菌的鉴定试验 37
2.3 结果与讨论 37-42
2.3.1 分离的菌株 37-38
2.3.2 耐高温乳酸菌的筛选 38-39
2.3.3 耐高温乳酸菌鉴定结果 39-42
2.4 本章小结 42-43
第三章 He-Ne激光诱变育种 43-50
3.1 材料及仪器 43
3.2 实验方法 43-45
3.2.1 菌株L1的He-Ne激光诱变育种 43-44
3.2.1.1 生长曲线的绘制 43
3.2.1.2 诱变参数的选定 43
3.2.1.3 菌悬液的制备 43
3.2.1.4 He-Ne激光诱变 43-44
3.2.1.5 存活率的计算 44
3.2.1.6 正突变率的计算 44
3.2.1.7 正突变菌株的性能考察 44
3.2.2 突变菌株的遗传稳定性分析 44-45
3.3 结果与讨论 45-49
3.3.1 生长曲线测定结果 45
3.3.2 激光诱变试验结果 45-47
3.3.2.1 第一次激光诱变结果 45-46
3.3.2.2 正突变菌株的获得 46-47
3.3.3 正突变菌株的性能考察 47-48
3.3.3.1 耐温能力测定结果 47-48
3.3.3.2 产酸能力测定结果 48
3.3.4 突变菌株的遗传稳定性分析 48-49
3.4 本章小结 49-50
第四章 突变菌株TL1的发酵条件优化 50-54
4.1 材料 50
4.2 实验方法 50
4.2.1 突变株TL1菌株发酵条件的优化 50
4.2.1.1 玉米粉浓度对TL1菌株生长的影响 50
4.2.1.2 麸皮浓度对TL1菌株生长的影响 50
4.2.1.3 最佳发酵条件的确定 50
4.3 结果与讨论 50-53
4.3.1 玉米粉浓度对TL1菌株生长的影响 50-51
4.3.2 麸皮浓度对TL1菌株生长的影响 51
4.3.3 最佳发酵条件的确定 51-53
4.4 本章小结 53-54
第五章 利用耐高温乳酸菌进行青贮试验 54-62
5.1 材料 54
5.2 实验方法 54-57
5.2.1 青贮饲料的调制 54-55
5.2.2 样品处理 55
5.2.3 发酵过程中各种菌数量的变化 55
5.2.4 不同处理组感官评定结果 55-56
5.2.5 青贮饲料主要成份分析 56-57
5.2.6 饲喂效果试验研究 57
5.3 结果与讨论 57-60
5.3.1 发酵过程中各种菌数量的变化结果 57-58
5.3.2 不同处理组感官评定结果 58
5.3.3 青贮饲料主要成份分析 58-60
5.3.4 饲喂效果试验研究结果 60
5.4 本章小结 60-62
第六章 耐高温乳酸菌在垃圾堆肥处理中的应用 62-68
6.1 材料 62
6.2 实验方法 62-63
6.2.1 菌种培养及堆肥样品制备 62
6.2.2 堆肥过程一般工艺参数测定 62-63
6.3 结果与讨论 63-67
6.3.1 温度的变化 63
6.3.2 含水率的变化 63-64
6.3.3 pH值的变化 64-65
6.3.4 挥发性有机质含量的测定 65-66
6.3.5 种子发芽指数(GI) 66-67
6.4 本章小结 67-68
第七章 结论与展望 68-70
7.1 结论 68-69
7.2 展望 69-70
参考文献 70-77

……略

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