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凝结芽孢杆菌在生猪养殖中的应用及其作用机理的研究进展
2020-10-18 10:09:55      点击:

摘要:近年来集约化养殖已成为畜牧业的发展方向,养殖规模越来越大,特别是生猪养殖是关乎民生的支柱性产业,占整个畜牧业养殖规模的一半以上。如何在保证生猪养殖业可持续发展的基础上,提高生产效益并达成无抗养殖已成为当下的研究热点。凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)作为一种新型饲用益生菌,兼具乳酸菌和芽孢杆菌的性质,既能产生乳酸,又能形成芽孢;具有改善生猪肠道健康、提高机体免疫力和抗病能力、调节肠道菌群平衡和提高动物生产性能等作用,在生猪养殖中具有很大的应用前景。作者概述了凝结芽孢杆菌的生物学特性;重点总结了凝结芽孢杆菌在无抗日粮、替抗方案、有抗日粮、与其他添加剂混合使用以及其他方面对生猪生产性能的影响;并从肠道健康与消化吸收、机体免疫力和肠道菌群平衡方面结合已有的试验结果分析了凝结芽孢杆菌对生猪生长性能改善的作用机理;提出了凝结芽孢杆菌在生猪养殖应用中存在的问题及建议,以期为进一步开发应用凝结芽孢杆菌制剂提供参考。

近年来,中国生猪养殖规模化程度逐渐提高,其产值占畜牧业生产总值的一半以上,但生猪产业仍面临着生产效率低下、肉质产品药物残留、环境安全等诸多问题。益生菌能够调节肠道菌群平衡、促进机体肠道健康和消化吸收、增强免疫力和提高生产性能,凝结芽孢杆菌也不例外。该菌由Sarles等首次进行了分离和描述,通过对其逐步的研究和认识,最终将其统一命名为凝结芽孢杆菌。凝结芽孢杆菌作为益生菌已获得包括美国食品药品监督管理局(FDA)和欧盟食品安全局(EFAF)的认可,已广泛应用于药品、食品和饲料添加剂等行业,中国于2004年逐渐批准凝结芽孢杆菌在饲料添加剂和其他行业使用。凝结芽孢杆菌的优势在于兼具乳酸菌和芽孢杆菌的性质,即可产酸,又能形成芽孢,是近年来研究的热门益生菌种之一。然而,目前关于凝结芽孢杆菌在生猪养殖上的应用报道并不多见,且结论存在差异。作者将针对凝结芽孢杆菌的生物学特性、生猪养殖应用的效果、益生作用机理、存在的问题及展望等方面进行简要综述,为其今后进一步应用于生猪领域提供一定的参考。

1凝结芽孢杆菌的生物学特性

凝结芽孢杆菌作为一种兼性厌氧菌,可形成芽孢和产生L-型乳酸,革兰氏染色为阳性,类属芽孢杆菌属。菌体表面无鞭毛,呈杆状,如头发丝状,长2.5~5.0μm,宽0.6~1.0μm;芽孢端生,如“榔头”状;喜中性偏酸pH,最适温度为37.0~45.0℃。生长过程中经同型乳酸发酵可将多种糖类物质转化为L-乳酸,从产酸的角度来说,它具有同乳酸菌类同样的保健功效;从芽孢形成角度来说,它具有芽孢杆菌属耐酸、耐热、耐盐、容易培养和保存的特点,而这一点也是其最主要的优势。耐热性方面,凝结芽孢杆菌经受高温处理1h,活菌数仅下降一个数量级,可以经受饲料制粒的温度考验;耐酸性方面,将芽孢总数为4.2×108CFU/mL的凝结芽孢杆菌置于pH>2.42的酸性溶液中,处理1年,其活菌数仍高达105CFU/mL;耐盐性方面,芽孢化的凝结芽孢杆菌在1%~8%NaCl溶液中可存活数周。但芽孢化的凝结芽孢杆菌在酸性条件下,菌体对热几乎没有耐受性,而且生长也会受到抑制;因此,在低pH条件下,凝结芽孢杆菌的抗逆性也会受到影响。在动物日粮中添加凝结芽孢杆菌,芽孢化的菌体形态能够顺利通过制粒、动物胃液环境,进入十二指肠后,芽孢萌发形成营养体,随后进入小肠,开始迅速生长繁殖,并发挥生物学功能。

2饲用凝结芽孢杆菌在生猪生产应用中的研究

2.1 饲用凝结芽孢杆菌对生猪生产性能的影响

2.1.1 凝结芽孢杆菌在无抗日粮中对生猪生产性能的影响

由于抗生素的耐药性及其残留问题,农业农村部已经明文规定抗生素在畜禽养殖业的使用,实行减抗替抗的策略。表1统计了近年来在无抗日粮中添加凝结芽孢杆菌对生猪生产性能的影响。首先是在断奶仔猪上的应用,在基础日粮中添加不同剂量的凝结芽孢杆菌,研究其对体重6~8kg断奶仔猪生长性能的影响,与对照组相比,添加凝结芽孢杆菌试验组平均日增重提高了18.74%、18.04%、19.23%,料重比下降了9.00%、5.60%、13.82%,平均日采食量提高了11.47%、腹泻率降低了66.48%、86.23%、50.25%。韩伟等研究了高剂量添加凝结芽孢杆菌对8kg断奶仔猪生长性能的影响,也得到了与前面一致的试验结果。Adami等在新生仔猪开始时就喂食凝结芽孢杆菌,试验组与对照组相比,添加凝结芽孢杆菌组日增重显著提高了16.00%、料重比显著降低了10.94%。其次,饲用凝结芽孢杆菌的添加在育肥猪上也有同样效果,霍军等和李国建研究了生长育肥猪日粮中添加1.0×104CFU/g凝结芽孢杆菌制剂对其生长性能的影响,与对照组相比,试验组日增重分别提高了13.42%和13.69%、料重比分别降低了11.83%和28.81%。综上,无论是在断奶仔猪还是育肥猪日粮中添加凝结芽孢杆菌(1.0×104~1.0×108CFU/g),对其生长性能均有正向积极效果,体现在增加日增重、降低料肉比和腹泻率等方面,但是合适的添加量需要进一步的探究。

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2.1.2 饲用凝结芽孢杆菌在替抗方案中对生猪生长性能的影响

在饲用抗生素日益“管控”的情况下,凝结芽孢杆菌作为“优质”益生菌在基础日粮中的添加能够起到很好的正向效果。与抗生素相比较,凝结芽孢杆菌的添加也具有良好的饲用效果,能够替代抗生素的使用。表2统计了凝结芽孢杆菌在替抗方案中对生猪生长性能的影响。洪文等和王向荣等在断奶仔猪日粮中添加凝结芽孢杆菌替代金霉素和组合抗生素(吉他霉素+喹乙醇+硫酸黏杆菌素)的使用,研究结果表明,两组仔猪生长性能无差异,可以替代金霉素和组合抗生素。还有研究表明,在日粮中添加凝结芽孢杆菌,不仅能够替代抗生素的使用,而且相比抗生素组还能够提高仔猪生长性能;如与金霉素组相比,其平均日增重、日采食量分别提高了13.38%和10.25%,料重比和腹泻率分别降低了2.83%和71.25%;替代阿莫西林的使用,断奶仔猪的日增重提高了16.02%、料重比降低了9.90%。另外,有研究在生长肥育猪日粮中添加不同剂量的凝结芽孢杆菌替代药物利菌净和抗生素喹乙醇、金霉素、杆菌肽锌的使用,结果表明,日粮中添加凝结芽孢杆菌的饲养效果与抗菌药和抗生素没有显著差异。综上所述,日粮中添加凝结芽孢杆菌不仅能够替代抗生素的使用,甚至生长性能还要优于抗生素组,主要体现在平均日增重的提高、料重比和腹泻率的下降,表明饲用凝结芽孢杆菌能够满足断奶仔猪和育肥猪良好生产性能的要求。

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2.1.3 饲用凝结芽孢杆菌在有抗日粮中对生猪生长性能的影响

抗生素具有杀菌抑菌的作用,在有抗生素存在的条件下,凝结芽孢杆菌也可在生猪日粮中添加。于冬友等在含有组合抗生素的商业仔猪日粮中添加凝结芽孢杆菌,研究其对断奶仔猪生产性能的影响,结果表明,组合抗生素+不同剂量的凝结芽孢杆菌(1×107、2×107CFU/g)与组合抗生素组相比,末体重和平均日增重均有提高趋势,但差异不显著;试验组腹泻率低于对照组,且高剂量组效果较好。黄遵锡等在组合抗生素的基础上添加5×106CFU/g凝结芽孢杆菌研究其对28日龄断奶仔猪的影响,试验结果表明,添加了凝结芽孢杆菌的试验组仔猪生长性能优于组合抗生素组,平均日增重提高了5.64%、料重比降低了3.27%;此外,添加饲用凝结芽孢杆菌的试验组仔猪腹泻率最低。因此,在含有组合抗生素的商业仔猪日粮中添加凝结芽孢杆菌也可以降低仔猪腹泻、提高生长速度,这可能和凝结芽孢杆菌有较强的抗逆性有关。

2.1.4 饲用凝结芽孢杆菌与其他添加剂组合方案对生猪生长性能的影响

微生态制剂的使用往往是一个综合方案,与其他益生菌、酶制剂、酸化剂、发酵原料等多种添加剂协同作用。表3总结了凝结芽孢杆菌与其他添加剂组合使用对生猪生长性能的影响。有试验研究了凝结芽孢杆菌与二甲酸钾、苯甲酸+牛至油、酪酸菌+巨大芽孢杆菌、乳酸菌组合使用对断奶仔猪生长性能的影响,结果表明,与对照组相比,其平均日增重提高了16.43%、17.21%、29.44%和12.71%;料重比降低了12.18%、5.29%23.46%;腹泻率降低了13.91%、83.33%、74.04%;以上结果均说明,凝结芽孢杆菌和其他益生菌或添加剂组合使用,具有协同作用,其效果优于单一添加剂的使用。但王乙茹等和黄遵锡等研究了饲用凝结芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌的组合使用效果,结果显示虽然这种组合使用能够替代抗生素,其生长性能与抗生素组对比均无显著差异,但不如添加单一凝结芽孢杆菌,可能是凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌之间会产生颉颃作用。综上,饲用凝结芽孢杆菌与其他益生菌或添加剂组合使用时,也能够提高生猪生产性能,甚至优于单一添加剂的使用,但是,也有些组合或出现反向效果。目前有关凝结芽孢杆菌与其他添加剂如何合理组合,还没有明确的机制,需要进一步的研究。

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2.2 饲用凝结芽孢杆菌对生猪其他方面的影响

凝结芽孢杆菌在生猪养殖中的应用,不仅体现在提高生产性能,增加养殖效益,而且在环境污染控制和疾病预防等方面也有一定的贡献。如高书峰等研究结果表明,日粮中添加凝结芽孢杆菌能够改善仔猪粪便氨的含量,与对照组相比,粪便氨含量降低了5.69%和7.20%,同时对猪舍空气中的氨、氮也有一定的降低,这可能和凝结芽孢杆菌促进了生猪对蛋白质原料的消化与吸收有关。此外,吴建忠等研究表明,灌服凝结芽孢杆菌能够预防乳猪黄白痢的产生。其在其他疾病预防和治疗效果如何,还需要进一步研究。随着凝结芽孢杆菌在生猪应用领域不断地深入研究,将来可能会在改善猪舍环境和降低畜牧养殖粪便污染、疾病治疗和防御等方面展示更大的应用价值。

3凝结芽孢杆菌在生猪生产应用中的作用机理

凝结芽孢杆菌作为一种新型益生菌,其确切的益生作用机制还不清楚,但学者们普遍认为益生菌发挥作用并不是一种单一物质那么简单,而是一个多种物质协同作用和肠道其他益生菌共同完成的综合方式。其具体作用机理总结如下:

3.1 改善生猪肠道健康、促进营养物质的消化吸收

动物摄食后饲料进入消化系统后,不是立即就能被消化利用,必须经过一系列的生理生化反应才能被降解为可利用的营养物质被机体吸收利用。凝结芽孢杆菌会通过分泌多种水解酶或酶促因子的方式,将大分子物质如果胶、葡聚糖、纤维素和木糖等降解,这样才能容易被动物体消化吸收,如可以产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、半纤维素酶等40多种动物内源性酶制剂,通过提高肠道消化酶的活力,改善机体的消化功能。另外,研究证明,凝结芽孢杆菌可以通过机体内的代谢途径来实现大分子物质的降解。这样使得肠道对营养物质更加充分地消化吸收,从而提高了生猪的生产性能。王乙茹等研究了日粮中添加凝结芽孢杆菌分别对仔猪和育肥猪饲料养分表观消化率的影响,试验结果表明,添加凝结芽孢杆菌2×106CFU/g组干物质表观消化率提高了2.26%、消化总能提高了2.11%。黄遵锡等在断奶仔猪中研究结果显示,干物质表观消化率也有提高的趋势。华洵璐等进一步研究了复合微生态制剂对断奶仔猪表观消化率的影响,试验组相比对照组粗蛋白质表观消化率分别提高了8.67%、10.88%、20.17%;粗纤维表观消化率分别提高了28.62%、29.08%、34.51%;其中凝结芽孢杆菌+巨大芽孢杆菌+酪酸菌一起复合效果最好,能够极大地促进饲料蛋白质和粗纤维的消化吸收,提高了仔猪日增重,降低了料重比。

完整的肠道形态不仅是肠道健康、营养物质消化和吸收的必备条件,也是抵御外源有害物质入侵的屏蔽结构,营养物质消化吸收的主要场所是肠绒毛,衡量小肠消化吸收功能的主要指标有绒毛高度、绒窝深度及其比值。余魁等进一步研究了凝结芽孢杆菌对仔猪肠黏膜形态结构的影响,结果表明,添加凝结芽孢杆菌可以改善肠道形态,与对照组相比,试验组十二指肠绒毛高度显著提高了4.73%和10.22%,绒毛表面积显著提高了10.60%和22.55%;空肠隐窝深度显著降低了21.02%和17.88%,绒毛高度/隐窝深度显著提高了39.86%和28.86%;回肠绒毛高度显著提高了12.89%和17.80%,绒毛高度/隐窝深度显著提高了7.95%和9.27%。另外,试验也从小肠代谢、发育、再生的角度证明凝结芽孢杆菌可以促进肠黏膜的生长。此外,吴梦郡等也证明了凝结芽孢杆菌的添加可以促进肠道对无机盐、营养物质和水分的转移,改善了肠道吸收功能。饲用凝结芽孢杆菌显著增加了仔猪空肠的绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度,促进肠道结构发育和对营养物质的转运,提高了仔猪对饲料营养的吸收效率,这也是料重比降低的原因之一。

另外,血液生化指标可在一定程度上反映机体的健康状况,与机体的营养吸收、代谢、疾病密切相关。王向荣等研究了凝结芽孢杆菌替代部分抗生素对仔猪血液生化指标的影响,与抗生素组相比,试验组可显著提高断奶仔猪血清中总蛋白(TP)含量,降低尿素氮(UN)含量,意味着猪体蛋白质沉积增加;加强了合成代谢,使组织蛋白合成保持正向作用,促进了组织器官的生长;此外,还发现添加凝结芽孢杆菌对血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性没有显著影响,说明凝结芽孢杆菌对仔猪肝脏和心脏无有害影响。韩伟等研究了添加高剂量凝结芽孢杆菌可使断奶仔猪提高对淀粉和非淀粉多糖的消化率,导致血清葡萄糖升高,TP和白蛋白(Alb)含量极显著升高,与王向荣的研究结果基本一致。TP、Alb的升高和UN的降低表征着仔猪对蛋白质和氨基酸的良好代谢,通过对蛋白质、氨基酸、肽类物质的吸收利用,有利于生猪生产性能的提高。但翟振亚等对断奶仔猪研究表明,饲用凝结芽孢杆菌+二甲酸钾(酸化剂)组合使用并不会引起仔猪血清生化指标含量的变化,这可能与凝结芽孢杆菌的配伍使用有关。再者凝结芽孢杆菌能够提升小肠蠕动的速度,使得肠道功能得以改善,从而促进机体对营养物质的消化与代谢。产生的乳酸不仅有降低pH的作用,还可以促进动物对铁、磷钙等矿物盐及维生素D等脂溶性营养物质的吸收,这对提高生猪生产性能也是至关重要的。

另一方面,机体中氧自由基过多时,如果不及时清除,会引起对动物体的氧化损伤,特别是对肠道的损伤,间接影响到肠道的吸收和消化。抗氧化功能的重要指标有总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)。如果凝结芽孢杆菌能够提高T-AOC、抗氧化酶类活性、降低MDA的含量,这将有利于机体免受氧化损伤,同时,凝结芽孢杆菌本身也可以产生具有显著抗氧化活性的胞外多糖使生猪免受氧化损伤。有试验研究了凝结芽孢杆菌的添加对仔猪抗氧化能力的影响,结果表明,添加凝结芽孢杆菌可使断奶仔猪血浆SOD活性提高9.49%;血清T-AOC活性提高28.00%;回肠GSH-Px的活力增加34.53%;血浆MDA含量降低18.67%、41.33%;血浆二胺氧化酶活力降低39.41%。证明了凝结芽孢杆菌的添加能够提高机体内T-AOC、SOD、TAC、GSH-Px活性,减少MDA的含量,有利于缓解生猪机体内氧化损伤,减弱应激环境下生猪生产性能的降低,促进肠道健康发育,增加对营养物质的消化吸收,从而达到降低料重比、增加日增重、提高生产性能目的。

3.2 提高生猪机体免疫力和抗病能力

肠道免疫系统是动物健康的重要防线,益生菌可以通过增加吞噬细胞的活性,刺激机体分泌溶菌酶,提高胸腺、脾脏、胃肠等器官对病原微生物的抵抗能力,而增强机体免疫能力。体外试验表明,凝结芽孢杆菌的发酵上清液及细胞壁中的成分具有调节细胞因子、抑制活性氧和增强细胞吞噬能力的作用,使得肠道免疫能力得以提高,能够在机体肠道构成一道生物保护屏障,促进消化道黏膜发生免疫反应。此外,能通过促进B淋巴细胞的增殖和免疫球蛋白的分泌提高体液免疫的水平;同时还能通过提高效应T淋巴细胞中肿瘤坏死因子TNF-α的含量,可用来防治某些特定病毒,如腺病毒和甲型流感病毒的感染。范毅等研究了基础日粮中凝结芽孢杆菌与乳酸菌的组合效果对肠道免疫能力的影响,二者组合使用能够显著提高断奶仔猪的免疫能力,其中试验组免疫球蛋白IgA、白介素(IL-1、IL-6)、肿瘤坏死因子-α相对于基础日粮组分别提高了13.93%、10.00%、67.03%和11.58%。但翟振亚等进一步研究了断奶仔猪血清免疫指标,结果表明,试验组血清中的IgA、IgG和IgM含量与抗生素组相比均无显著变化。韩伟等研究发现,日粮中添加凝结芽孢杆菌使得断奶仔猪血清IgG含量有所下降,这可能和对照组日粮中含有抗生素有关,具体的机制有待进一步研究。另外,免疫器官指数的改善也可能是生猪免疫力提高的一个主要原因,虽然在生猪中未见确切报道,但类比凝结芽孢杆菌对肉鸡免疫器官指数的提高,也可以看出凝结芽孢杆菌确实有利于动物免疫器官的发育。综上,生猪养殖过程中添加凝结芽孢杆菌可以提高机体免疫能力,改善免疫器官、免疫细胞和促进动物本身的健康生长,激活自身免疫系统,从而增强机体抵抗力和保护机体,降低生猪腹泻率和患病率。

3.3 调节生猪肠道菌群结构,抑制病原菌

动物肠道内菌群结构是一个复杂的“大家庭”,既有有益菌,也有有害菌,一般情况下二者维持在一个平衡状态,但当肠道内有害菌“过量”并打破这种状态时,动物就会发病。凝结芽孢杆菌主要通过以下途径来维持这种平衡。首先,凝结芽孢杆菌作为一种兼性厌氧菌,当它进入动物体内生长繁殖时,有氧气的存在下,会消耗游离的氧,从而降低肠道内氧化还原电势,这种环境下,可以促进有益菌的增殖而抑制有害菌的生长。其次,凝结芽孢杆菌可以利用多种糖类进行同型乳酸发酵,产生大量L-乳酸,使动物肠道pH降低,而这种低pH环境下,也有利于肠道有益菌,特别是乳酸菌的生长繁殖,有效地抑制嗜碱性乃至中性致病菌的生长。最后,凝结芽孢杆菌在生长繁殖过程中会产生抑菌物质凝固素和Lactoporin。凝固素是一种大小为4612u的小肽类物质,其结构已经被解析出来,与片球菌素极为相似。其本身就具有较强的抑菌效果,可对链球菌、金黄色葡萄球菌等致病菌有颉颃作用。Lactoporin作为一种阴离子抗菌物质,其机理在于该物质可以形成细胞内外质子动力势差,导致病原微生物胞内蛋白质、核酸以及肽多糖的代谢减弱,对致病菌起到有效的抑制作用。

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凝结芽孢杆菌制剂在调节生猪肠道菌群结构方面的影响见表4。有学者进一步研究了凝结芽孢杆菌对断奶仔猪肠道菌群结构的影响,凝结芽孢杆菌的添加有助于肠道有益菌的增殖,与对照相比,乳酸菌数量提高了1.83~2.30、4~10和11.86倍;双歧杆菌数量提高了1.20~6.93和6.33倍;肠球菌数量提高了8.25~9.35倍;同时显著降低了肠道有害菌大肠杆菌和沙门氏菌的数量。Adami等试验结果也证明,日粮中添加凝结芽孢杆菌可以提高仔猪肠道乳酸菌含量,降低大肠杆菌数量。李国建和霍军等在育肥猪日粮中添加1.0×104CFU/g的饲用凝结芽孢杆菌发现,沙门氏菌检出率与对照组(无抗日粮)相比分别降低了21.24%和26.97%,和加药组相比降低了8.36%和9.13%。王向荣等和黄遵锡等也研究了仔猪粪便中微生物菌群情况,其结果与前人报道基本一致。综上,在生猪日粮中添加凝结芽孢杆菌,可以改变肠道菌群结构,促进乳酸菌、双歧杆菌等益生菌的生长繁殖;抑制肠道大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌的定植或生长。肠道菌群平衡是肠道健康的一种体现,从而促进生猪对营养物质的吸收和较少腹泻率。

4存在的问题和展望

综上所述,凝结芽孢杆菌能够一定程度提高生猪日增重,降低料重比、腹泻率和替代抗生素和药物的使用,也可用于降解氨氮、除臭、环保等方面。中国对凝结芽孢杆菌的研究和应用在生猪养殖中仍存在以下问题:①凝结芽孢杆菌作为一种微生态产品,其本身产品性能差异较大,要保障凝结芽孢杆菌产品质量可靠,在菌株特性的确定、总菌数和芽孢化率的保证、杂菌率的控制等方面还有很大的提升空间。应从发酵工艺入手,解决目前国内单一液体发酵的方式,可使用固体发酵以及混合发酵;此外,在发酵培养基、参数、工艺优化等方面也有待深入研究。②在生猪日粮中的最适添加剂量方面比较宽泛(1.0×104~1.0×108CFU/g),差异近乎4个数量级,不利于凝结芽孢杆菌在实际应用中的推广。针对此类问题应当根据不同生猪品种、不同时期、菌株特点和其他因素进行系统全面的研究,做到“精准定位”,以便为实际应用提供一定的依据。③有关凝结芽孢杆菌在生猪应用的报道主要集中在单一产品的应用,而与其他益生菌、酶制剂、酸化剂等添加剂复合使用的效果、理论机制值得深入研究与探讨。总之,随着人们对凝结芽孢杆菌的进一步深入研究,不久的将来,饲用凝结芽孢杆菌在生猪养殖业中的开发和应用将更加科学合理。

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